丙肝 | 丙肝的实验室检测

我国是全球HCV流行最为严重的国家之一，根据血清流调并结合高风险人群监测结果，估计我国HCV感染人群约760万，其中约456万是需要治疗的慢性丙肝患者，如不及时治疗，部分可进展为肝硬化或肝癌。近年来我国每年丙肝报告病例数均在20万例左右^[1,2]。按发病日期统计，2021年全国共报告丙肝20.3万例，居全国甲、乙类传染病报告数的第4位，其中新报告病例男女性别比为1.39 :1，年龄以35-74岁为主，占83%，农民和居家待业病例占74%以上，确诊病例的比例占55%^[1]。

丙肝病例报告情况^[1]

HCV核心抗原检测

HCV核心抗原(HCV-cAg)检测是20世纪90年代发展起来的新型技术，研究发现HCV-cAg在HCV-RNA出现后的1-2天内即出现（窗口期12至15天），且与血清中HCV-RNA载量呈正相关^[3-5]，是丙肝检测的重要指标。

◆应用前景

缩短窗口期，有利于病情控制和血液安全

人感染HCV到产生HCV抗体(HCV-Ab)的平均时间约60天，被称为HCV-Ab的窗口期。但HCV-cAg于HCV感染后12～15天即可检测到，较HCV-Ab出现提前5～7周^[6]。

筛选高危人群的丙肝感染

丙型肝炎的高危人群如血透析患者、静脉内注射毒品者、男男性接触人群、性工作者、性病患者和器官移植患者等，感染HCV的危险性较高，对他们定期检测HCV-cAg，可早期发现HCV感染^[6]。

鉴别HCV既往感染或现症感染

HCV感染治愈或康复后，HCV-Ab持续阳性，而HCV-cAg消失。因此，同时检测HCV-cAg与抗体，可以鉴别是既往感染抑或现症感染^[6]。

用于抗病毒疗效的监测

在丙肝治疗过程中，HCV-cAg检测可用于监测抗病毒疗效和预测持续病毒学应答反应。

HCV抗体检测

HCV-Ab是丙肝筛查的常规指标之一，但是HCV-Ab检测有一定的窗口期，平均为70d^[3,7,8]，对于个别因免疫缺陷或免疫系统发育不完全者，HCV-Ab可持续阴性，因此不适于丙肝感染的早期检测，且可能存在漏检风险；另外，HCV-Ab可终身携带，HCV-Ab阳性不代表体内一定有HCV复制，不能用于监测抗病毒疗效^[3,9]。

HCV核酸检测

HCV-RNA一般在患者感染7-14d时，可在血清中检测到^[3,10,11]。但HCV-RNA检查对标本以及实验室环境和设备的要求都比较高，如果实验标本采集保存不当，会导致病毒核酸降解，导致假阴性。同时，HCV-RNA对检测人员要求高，很难在基层医院开展，因此HCV-RNA不适用于丙肝感染的大规模筛查^[3,12]。

HCV基因分型检测

HCV基因分型分析是HCV病毒感染确诊后的治疗方案的基础，HCV基因分型检测能够提升治疗安全性，降低患者的经济负担，以达到更佳治疗目的。基因分型的检测依据是对NS5核酸序列进行分类，包括直接测序、限制性片段长度多态性分析(RFLP)法、型特异性探针杂交(LiPA)法、特异性引物扩增法、特异引物延伸分析法(PSEA)、荧光共振能量转移探针的解离曲线分析法、基因芯片技术、遗传系统进化树分析法等分子生物学分型方法，以及针对NS4区多肽诱发的基因型特异性抗体进行检测的血清学分型方法^[13,14]。

HCV耐药相关基因检测

直接抗病毒(DAA)药物容易产生耐药性，目前检测耐药相关基因突变的方法有DNA测序法和体外表型分析法，前者包括PCR产物直接测序法、新一代深度测序方法，后者则是测定抑制病毒复制所需的药物浓度，如半最大效应浓度(EC50)。目前已确认的耐药相关突变位点主要有：①NS3/4A靶点相关：V36M、T54A、Q80K、R155K、A156T和D168V；②NS5A靶点相关：M28T、Q30E/H/R、L31M、H58D和Y93H/N；③NS5B靶点相关：S282T、C316N/H/F、M414T、A421V、P495L/S和S556G等^[15]。

但是，目前国内外指南推荐的主流治疗方案（包括泛基因型方案和基因型特异性方案）的耐药率很低，故一般不再推荐在治疗前进行耐药基因检测。

丙肝多指标联合检测检测

目前，实验室用于检测丙肝的方法主要有丙肝核心抗原检测、丙肝抗体检测和HCV-RNA检测，而多指标联合检测可提高丙肝病毒检出率、减少检测窗口期和漏检率。

参考文献：

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